本发明提供了一种胱抑素C抗原、抗体、试剂盒及其制备方法与应用。所述胱抑素C抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有相同免疫原性和相同抗原性的氨基酸序列。通过该免疫原制备兔抗人胱抑素C多克隆抗体；并将抗人胱抑素C多克隆抗体包被在载体上制备成试剂盒，用于胱抑素C抗原的检测。本发明首次设计合成一种新的胱抑素C抗原和抗胱抑素C抗体，该抗体具有优异的降低钩状效应的性能，远远高于目前现有的抗胱抑素C抗体。本发明试剂盒适抗胱抑素C抗体用量少，适用于多种不同试剂配方，适用范围广。
本发明公开了一种重组人胱抑素C基因及其表达与应用。该截短人胱抑素C基因具有SEQ ID NO：1所示核酸序列；截短人胱抑素C蛋白具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列。本发明运用基因工程技术表达纯化大量稳定的重组可溶胱抑素C蛋白并利用该蛋白获得了一对单抗，进而制备了稳定的胱抑素C诊断试剂及其质控品。解决了我国人胱抑素测定试剂盒自主研发的瓶颈问题。
滇池金线鲃胱抑素基因及其应用，属于生物医学技术领域。滇池金线鲃胱抑素的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，编码滇池金线鲃胱抑素的基因由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列组成。其成熟滇池金线鲃胱抑素为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的第61–432位核苷酸，其氨基酸序列为如SEQ ID NO：2所示。滇池金线鲃胱抑素在制备组织蛋白酶B抑制剂中的应用。有益效果是：由滇池金线鲃胱抑素编码基因推导其氨基酸结构，进行原核表达，纯化后的滇池金线鲃胱抑素具有强烈的抑制组织蛋白酶B的活性，该滇池金线鲃胱抑素具有体外生产方便、抑制组织蛋白酶B活性强大的特点。滇池金线鲃胱抑素在2μM浓度能抑制60％的组织蛋白酶B活性，8μM浓度滇池金线鲃胱抑素能抑制87％的组织蛋白酶B活性。
本发明公开了一种重组人胱抑素C编码基因与表达方法，该编码基因的核苷酸序列见SEQ ID NO：1，重组人胱抑素C蛋白的表达方法，包括以下步骤：将重组人胱抑素C编码基因插入到原核表达载体的多克隆位点，构建重组表达质粒，将重组表达质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌，筛选出阳性克隆菌，得工程菌；工程菌经发酵、诱导、分离、纯化，得重组人胱抑素C蛋白。本发明提供的重组人胱抑素C编码基因，能表达人胱抑素C蛋白，操作方便，且由编码基因表达的人胱抑素C蛋白，纯度达90%以上，表达效率高，目前未见表达效率更好的报道。
本发明公开了一种提高人胱抑素C蛋白在大肠杆菌中可溶性表达量的发酵方法，该编码基因的核苷酸序列SEQ ID NO：1，重组人胱抑素C的表达方法，包括以下步骤：直接合成并优化密码子，将重组人胱抑素C插入到原核表达载体的多克隆位点，构建重组表达质粒，将重组表达质粒转化到表达宿主菌大肠杆菌，筛选阳性克隆，得工程菌，工程菌经发酵、诱导、分离、纯化，得重组人胱抑素C。通过优化发酵罐的溶氧，pH，搅拌速率，补料条件，使蛋白的产量可以达到0.4g/L，且活性和天然胱抑素C蛋白相近。本发明提供的重组胱抑素C发酵放大生产方法，操作简单，且表达的胱抑素C产量高达0.4g/L，纯度达到95％以上，同时利用重组人胱抑素C蛋白制备多抗血清和标准品，目前未见表达效率更好的报道。
